CMV感染是异基因HSCT术后严重的并发症之一，与急性和慢性GVHD的风险增加有关。目前CMV感染的治疗措施包括免疫抑制剂减量、使用抗病毒药物和CMV特异性T细胞过继治疗等。既往系列病例报道证实大剂量 IVIG或高滴度CMV-IVIG联合更昔洛韦治疗，可提高CMV肺炎的免疫缺陷患者生存率。目前IVIG对CMV感染的治疗存在争议，2017欧洲白血病感染会议仅推荐IVIG用于治疗 CMV肺炎。

遵循目前国际共识，针对CMV肺炎，推荐抗病毒药联合高滴度的CMV-IVIG0.15 g/kg，隔天1次，治疗2周，共7次，然后每周1次，共4周；若无CMV-IVIG可用，推荐标准化的IVIG0.5g/kg，疗程同CMV-IVIG。

一、静注巨细胞病毒人免疫球蛋白体外药效学研究

1.目的

实验室确认静注巨细胞病毒人免疫球蛋白（pH4）（human cytomegalovirus immunoglobulin for intravenous injection，CMV-IVIG）抑制巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）感染的有效性。

2.方法

分别通过免疫荧光染色和细胞病变实验测定CMV-IVIG抑制CMV的即早基因1表达和致细胞病变能力，确认CMV-IVIG有效性。

3.结果

即早基因1表达量与病变细胞数量随着制品稀释倍数的增加而增加；27倍稀释的CMV-IVIG可抑制90.77%~95.85%的CMV感染力；103倍稀释的CMV-IVIG可抑制＞90%的细胞病变。

4.结论

CMV-IVIG中的中和抗体能特异性中和CMV，阻止CMV感染细胞，且具有良好的量效关系。

5.正文       

巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）是疱疹病毒科β属的DNA病毒，在发展中国家成年人中感染率可达100%。虽然通常呈隐性感染，但当机体免疫功能低下时，病毒可被激活而发生显性感染。孕妇初次或复发CMV感染引起新生儿宫内感染或围产期感染侵袭胎儿，是导致先天畸形的重要原因之一。目前尚无治疗CMV感染疾病的特效药物，由于抗CMV抗体可以保护特定人群抵抗CMV感染疾病，因此，目前使用抗病毒药物或联合抗病毒药物和静注巨细胞病毒人免疫球蛋白预防和治疗CMV感染疾病。

CMV基因组复制缓慢，基因表达具有严格的时相性。即早基因（immediate early gene，IE）1在感染后3 h开始在细胞核中表达，6 h后即可被检出；而CMV晚期基因的转录和翻译发生在感染后的36~48 h[11]。因此，采用免疫组织化学法可使感染CMV的细胞核特异性着色。

二、具体研究过程

1.方法：

IE1表达量抑制实验。CMV-IVIG与中和用CMV等量混和，每个浓度样品2个复孔，37 °C、5%CO2中和1 h。然后加入MRC-5细胞于37 ℃、5%CO2培养16~18 h。同时设阳性对照（维持液代替CMV-IVIG）和阴性对照（维持液代替CMV-IVIG和病毒）。经过细胞固定、封闭及加抗CMV IE1单克隆抗体、生物素化抗鼠IgG、亲和素化链霉抗生物素蛋白，最后显色。显色后在体视显微镜下采集各孔图像，用克隆计数软件计数每孔的特异性着色细胞核。

细胞病变实验。CMV-IVIG与同体积的CMV于37 ℃、5%CO2中和1 h后，加入 MRC-5细胞于37 ℃、5%CO2培养48 h，设阳性对照（维持液代替CMV-IVIG）和阴性对照（维持液代替CMV-IVIG和病毒），在倒置生物显微镜下观察MRC-5细胞的致细胞病变程度，记录观察结果。

2.结果：

IE1表达量抑制实验结果：

同体积的不同稀释倍数CMV-IVIG在加入相同量的CMV后，残留病毒数不同，残留病毒感染细胞后在细胞核内表达的IE1数量也不同，经染色后计数结果也不同。稀释倍数越高，特异性着色的细胞核越多，即IE1表达越多。

随着CMV-IVIG稀释倍数的增加，降低病毒感染力的程度减小，病毒感染力增强（IE1表达越多）。在128倍稀释度时，能降低约93%的病毒感染力，而在4096倍稀释度时50%样品降低病毒感染力的能力已降到0。

细胞病变实验结果：

同体积的不同稀释倍数的CMV-IVIG能中和的同体积病毒液中的病毒数不同，残存的病毒导致的MRC-5细胞病变的范围程度也不同。随着CMV-IVIG稀释程度的增加，相同体积样品内含有的CMV-NA量也减少，而致细胞病变的程度增加，说明CMV-NA能特异性有效阻止CMV感染细胞，避免细胞发生病变。

3.讨论：

IE1表达量抑制实验结果中，随着CMV-IVIG稀释倍数的增加，相同体积样品内含有的CMV-NA量也减少，IE1表达越多，即病毒感染力越强，CMV-IVIG 能降低病毒感染力的程度越小，在128倍稀释时，杀灭了绝大部分病毒（平均93%），而在4096倍稀释时50%样品已无降低病毒感染力能力（IE1表达与阳性对照一致）。细胞病变实验结果显示，随着制品稀释程度的增加，致细胞病变的程度也在增加，说明CMV-NA能特异性有效阻止CMV感染细胞，避免细胞发生病变。

体外药效学研究结果显示：CMV-IVIG所含有的特异性中和抗体能有效中和病毒，阻止CMV感染细胞；中和病毒的能力与CMV-IVIG中的中和抗体含量呈正相关，具有良好的量效关系。基于上述结果，CMV-IVIG应具有相应的临床药效。